Información General

Género: Salmonella

Especie: typhi

La Salmonella typhi es un bacteria que se transmite por medio de alimentos o agua contaminados con materia fecal y orina de personas portadoras. Es resistente a bajas temperaturas lo que le permite transmitirse a través de alimentos conservados a bajas temperaturas.

La fiebre tifoidea o fiebre entérica es causada por Salmonella Typhi de la que el ser humano es el único portador. Es una enfermedad infecciosa intestinal, grave y aguda que constituye un problema severo de salud pública en casi todo el mundo, aunque su incidencia ha disminuido en países con mejores niveles de higiene y saneamiento ambiental.

  Salmonella typhi observada en microscopio electrónico

Genero Salmonella

Salmonella, es un grupo de  bacterias similares, aunque no idénticas. El genero Salmonella es de taxonomía difícil, modificada en estos últimos años por el aporte de estudios moleculares de homología de ADN que han clarificado el panorama taxonómico de las enterobacterias.

 Estas bacterias llevan el nombre del científico que las descubrió, el ​​Dr. Daniel Salmon. La mayoría de los componentes de estas bacterias son idénticos, y al nivel del ADN, son entre 95% y 99% idénticos.

Como su nombre indica Salmonella entérica  están involucrados en la causa de las enfermedades de los intestinos (medios entéricos relacionados con el intestino).

 Los tres principales serotipos de Salmonella entérica son Typhimurium, Enteritidis y S. typhi . Estas distinciones se están diseñadas para ayudar a los científicos a distinguir entre bacterias similares en las investigaciones científicas y cuando se discute de la genética.

Los  serotipos de Salmonella entérica pueden ser subagrupados aún más por el "fago". Esta técnica utiliza la especificidad de fago para diferenciar entre las bacterias estrechamente relacionadas. A menudo, estas bacterias son indistinguibles por otros medios, y de hecho, las razones para las diferencias en la especificidad del fago a menudo no se conocen.

Daniel Elmer Salmón (1850-1914)

Especies comunes de Salmonella

Salmonella enterica serovar Typhi. (También llamada Salmonella typhi o abreviado S. Typhi)  Esta bacteria es el agente causal de la fiebre tifoidea.  A pesar de la fiebre tifoidea no está muy extendida en los Estados Unidos, es muy común en los países subdesarrollados, y causa una enfermedad grave ya menudo fatal. Los síntomas de la fiebre tifoidea incluyen náuseas, vómitos, fiebre y la muerte.  A diferencia de las otras Salmonellas, S. Typhi sólo puede infectar a los humanos, y ningún otro huesped ha sido identificado.  La principal fuente de la infección por S. Typhi es por la ingestión de agua infectada.  Los alimentos también pueden estar contaminados con S. Typhi, si se lavan o riegan con agua contaminada.

Salmonella enterica serovar Typhimurium (también llamada Salmonella typhimurium o abreviado a S. typhimurium)  Hasta hace poco tiempo la causa más común de intoxicación alimentaria por Salmonella sp se debió a S. Typhimurium.  Como su nombre lo indica, causa una enfermedad similar a la fiebre tifoidea en ratones.  En los seres humanos S. typhimurium no causa la enfermedad severa como S. typhi, y normalmente no es fatal.

Salmonella enterica serovar Enteritidis  (también llamada Salmonella enteritidis o S. enteritidis abreviado) En los últimos 20 años más o menos, S. Enteritidis se ha convertido en la causa más común de intoxicación alimentaria en los Estados Unidos. S. Enteritidis causa una enfermedad casi idéntica a la muy estrecha relación S. typhimurium. S. Enteritidis es particularmente adepto a infectar a pollos sin causar enfermedad visible, y se difunde rápidamente de gallina a gallina.

Tipo de microorganismo

 Salmonella typhi es una enterobacteria con las

siguientes caracteristicas:

-Bacilo Gram negativo

-Flagelos peritricos

-No encapsulado

-No esporulado

-No fermenta lactosa

-No productor de gas al fermentar glucosa

-Anaerobio facultativo

-Producen ácido sulfúrico (H2S)

-No producen ureasa

Observacion de morfologia de S.typhi en microscopio (1000 X)

Dibujo de Salmonella Typhi


En las imagenes anteriores se muestran la morfologia de la Salmonella typhi, se observa su forma de bacilo y los flagelos peritricos.

Hábitat natural

Su hábitat natural lo constituye el tracto digestivo del el hombre. El único reservorio de Salmonella typhi es el hombre, de modo que se trasmite de una persona a otra. El mecanismo de contagio es fecal-oral, por contacto directo o contaminación cruzada durante la manipulación de alimentos, por vía sexual o a través de agua.

Presenta unos requerimientos para su desarrollo que son particularmente exigentes en términos de agua disponible, temperatura y pH del medio.
La multiplicación de Salmonella no es posible con valores de actividad de agua (Aw) inferiores a 0,93. La velocidad máxima de crecimiento tiene lugar a una temperatura de 35-37 ºC.  En cuanto al pH, Salmonella muestra un crecimiento óptimo entre valores de 6,5 a 7,5, viéndose éste detenido cuando el pH se sitúa por debajo de 4,5 o supera el valor de 9,0.
Es capaz de resistir la acción de la bilis y permanecer en la vesícula biliar del hombre.

Proceso de contagio de S.typhi

En la imagen se muestra como es que la bacteria S.typhi infecta el intestino del ser humano, dando como resultado heces contaminadas.

Tipo de nutrición

Salmonella thypi es un microorganismo quimioorganotrofo con pocos requerimientos nutricionales por lo que pueden crecer en medios de cultivo relativamente simples. Utiliza compuestos orgánicos como fuente de carbono y energía.

El género Salmonella se incluye en la familia Enterobacteriaceae, integrada por bacilos Gram negativos anaerobios facultativos. Poseen, por lo tanto, las características generales de las enterobacterias: son fermentadores de la glucosa sin producción de gas, por poseer una enzima especializada, pero no fermenta lactosa, esto en condiciones anaeróbicas y en condiciones aeróbicas es capaz de utilizar nitrato como último aceptor de electrones. También utiliza el citrato como única fuente de carbono, y puede descorboxilar lisina.

Detalle ampliado de colonias de Salmonella spp en agar sangre.

Importancia en el área de alimentos

La contaminación por Salmonella en alimentos es un riesgo real y debe ser abordado desde el conocimiento de las diferentes materias primas y proveedores.  La fiebre tifoidea es la enfermedad causada por esta bacteria;  con 16 -33 millones de casos estimados en el mundo, causando entre 500,000 y 600,000 muertes, la OMS identifica la fiebre tifoidea como un problema serio de salud pública. 

La simple presencia de Salmonella, aun en bajas cantidades, representa un riesgo importante ya que, de darse las condiciones ambientales necesarias, se produce inevitablemente la multiplicación y proliferación del microorganismo. Sólo a través del control de alimentos en origen y de unas buenas prácticas de manipulación en toda la cadena se puede reducir la incidencia y llegar a su erradicación.

Propagación de la fiebre tifoidea en el mundo causada por S.typhi

Hábitat de donde se aisla el microorganismo

El hábitat principal de la Salmonella es el tracto intestinal del hombre. Este tipo de microorganismo es excretado en las heces, y esto a su vez puede ser transmitido por insectos u otros seres vivos. También puede ser encontrado en el agua. Es decir que este tipo de microorganismo puede contaminar agua y alimentos que al ser consumidos por personas y animales vuelven a ser diseminados por medio de la materia fecal cerrando su ciclo.

Se puede tomar una muestra de alimentos contaminados incluyendo:

Huevo

Productos no pasteurizados congelados de huevo

Productos que contienen huevo en su formulación

Leche en polvo, entera, semidescremada o descremada

Queso

Caseína

Coco

Levadura seca

Carnes, sustitutos de carnes, derivados cárnicos, sustancias de origen animal, productos glandulares y harinas (pescado, carne y hueso).

Productos procesados térmicamente y productos secos.

Productos crudos o altamente contaminados

Dulces y dulces cubiertos (incluyendo chocolate)

Especias

Ajo en polvo u hojuelas; cebolla en polvo u hojuelas

Gelatina

Diagrama de flujo para la determinación de Salmonella

La presente técnica para la detección de Salmonella en alimentos, describe un esquema general que consiste de 5 pasos básicos:

1.-  Preenriquecimiento, es el paso donde la muestra es enriquecida en un medio nutritivo no selectivo, que permite restaurar las células de Salmonella dañadas a una condición fisiológica estable.

2.-  Enriquecimiento selectivo, empleado con el propósito de incrementar las poblaciones de Salmonella e inhibir otros organismos presentes en la muestra.

3.-  Selección en medios sólidos, en este paso se utilizan medios selectivos que restringen el crecimiento de otros géneros diferentes a Salmonella y permite el reconocimiento visual de colonias sospechosas.

4.-  Identificación bioquímica, este paso permite la identificación génerica de los cultivos de Salmonella y la eliminación de cultivos sospechosos falsos.

5.-  Serotipificación, es una técnica serológica que permite la identificación específica de un cultivo.

Medios de cultivo a utilizar

Norma oficial mexicana NOM-114-SSA1-1994, bienes y servicios. Método para la determinación de salmonella en alimentos.

Para diversos alimentos existen diferentes protocolos para el aislamiento de Salmonella, todos ellos son esencialmente similares en principio y emplean las etapas de preenriquecimiento, enriquecimiento selectivo, aislamiento en medios de cultivo selectivo y diferencial, identificación bioquímica y confirmación serológica de los microorganismos.

Las sustancias químicas usadas para preparar los medios de cultivo y los reactivos deben ser grado analítico.

1.0 Medios de pre-enriquecimiento

1.1 Agua de peptona tamponada

Fórmula

Ingredientes /Cantidades Unidades

·         Peptona 10,0 g

·         Cloruro sódico 5,0 g

·         Fosfato sódico dibásico 3,5 g

·         Fosfato potásico monobásico 1,5 g

·         Agua 1,0 l

Preparación

·         Disolver los componentes en agua, calentando si es necesario.

·         Ajustar el pH, si es necesario, después de la esterilización a 7,0.

·   Distribuir en recipientes de vidrio esterilizables con la capacidad necesaria para obtener las    porciones necesarias para la prueba.

            ·         Esterilizar por 20 min a 121 ±; 1°C

1.2 Caldo lactosado   

 Fórmula

Ingredientes/Cantidades Unidades

·         Extracto de carne 3,0 g

·         Peptona 5,0 g

·         Lactosa 5,0 g

·         Agua destilada 1,0 l

·         pH final: 6,9 ±; 0,2

Preparación

·         Disolver los ingredientes en agua, calentando a 65°C.

·         Distribuir en porciones de 225 ml, en frascos de 500 ml.

            ·         Esterilizar durante 15 min a 121°C ±; 1°C.

       

2.0 Caldo de enriquecimiento

2.1 Caldo selenito-cistina

Fórmula

Ingredientes/Cantidades Unidades

·         Triptona o polipeptona 5,00 g

·         Lactosa 4,00 g

·         Fosfato disódico 10,00 g

·         Selenito ácido de sodio 4,00 g

·         L-cistina 0,01 g

·         Agua destilada 1,00 l

·         pH final: 7,0 ±; 0,2 a 25°C

Preparación

·         Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril y distribuir en volúmenes de 10 y 225 ml en recipientes estériles, según se requiera.

·         El caldo así preparado es transparente. De preferencia usarlo el mismo día de su preparación.Si se desea conservar el medio por varios días, puede exponerse al calor en autoclave por 5 min a  110°C±; 1&°C, tomando entonces un color salmón.

2.2 Caldo tetrationato

Fórmula

Ingredientes/Cantidades Unidades

·         Proteosa peptona o triptona 5,0 g

·         Sales biliares 1,0 g

·         Carbonato de calcio 10,0 g

·         Tiosulfato de sodio pentahidratado 30,0 g

·         Agua destilada 1,0 l

·         pH final: 7,0±0,1

Preparación

·         Disolver los ingredientes en un litro de agua destilada estéril.

·         Distribuir, agitando constantemente, en porciones de 10 y 225 ml, en recipientes estériles. Guardar en refrigeración.

·         Antes de usar el medio, agregar 2 ml de una solución yodo-yoduro y 1 ml de solución de verde brillante al 0,1% por cada 100 ml de caldo. El medio una vez adicionado de yodo no debe calentarse y debe usarse el mismo día de su preparación.

2.3 Vassiliadis-Rappaport

Fórmula 

Solución A

Ingredientes /Cantidades Unidades 

  ·         Triptona 5,0 g 

  ·         Cloruro de sodio 8,0 g 

  ·         Fosfato de potasio dihidrogenado 1,6 g

  ·         Agua destilada 1,0 l 

 Preparación. 

Disolver los componentes en agua por calentamiento cercano a 70°C. 

Solución B

Ingredientes /Cantidades Unidades

  ·         Cloruro de magnesio hexahidratado 400,0 g 

  ·         Agua destilada 1 litro.

  ·         Disolver el cloruro de magnesio en agua.

Como esta sal es muy higroscópica es conveniente disolver el contenido entero de cloruro de magnesio desde un recipiente recientemente abierto de tal modo que la concentración de la solución sea de 0,4 g/ml.

Conservar en frasco ámbar a temperatura ambiente.

Solución C

Ingredientes/ Cantidades Unidades 

·         Oxalato de verde de malaquita 0,4 g

·         Agua destilada 100,0 ml 

·         Disolver el oxalato de verde de malaquita en agua.

      ·         Conservar en frasco ámbar a temperatura ambiente.

Medio completo

Ingredientes/ Cantidades Unidades

·         Solución A 1000 ml

·         Solución B 100 ml

·         Solución C 10 ml

Preparación

Adicionar 1 000 ml de la solución A, 100 ml de la solución B y 10 ml de la solución C.

Ajustar el pH si es necesario, de tal manera que después de la esterilización sea de 5,2.

Distribuir antes de usar dentro de tubos en cantidades de 10 ml.

Almacenar en refrigeración.

2.3 Caldo de soya tripticasa

Fórmula

Ingredientes /Cantidades Unidades

·         Tripticasa o triptosa 17,0 g

·         Fitona 3,0 g ·         Glucosa 2,5 g 

·         Cloruro de sodio 2,5 g

·         Agua destilada 1,0 L.

·         pH final: 7,3 ±; 0,2 

 Preparación 

Disolver los ingredientes en 1 litro de agua destilada, calentando lentamente hasta su disolución completa.Distribuir porciones de 225 ml dentro de matraces de 500 ml y esterilizar en autoclave durante 15 min a 121°; C ±; 1°C.

2.4 Leche descremada reconstituida

·        Suspender 100 g de leche descremada en polvo en un litro de agua destilada.

·         Agitar circularmente hasta disolución.

·        Distribuir en volúmenes de 225 ml en matraces Erlenmeyer de 500 ml.

·         Esterilizar a 121°C ±; 1°C por 15 min. El volumen final debe corregirse para mantener 225 ml.

 2.5 Caldo soya tripticasa estéril adicionado con sulfito de potasio

·         Adicionar al caldo soya tripticasa 5 g de sulfito de potasio por cada 1000 ml de medio, quedando una        concentración final de sulfito de potasio del 0,5%.  

·         Adicionar el sulfito de potasio antes de esterilizar en autoclave en la forma habitual.

      3.0 Medios de aislamiento

     

     3.1 Agar verde brillante (VB)

     Fórmula

       Ingredientes /Cantidades Unidades

·         Extracto de levadura 3,0000 g

·         Polipeptona (Proteosa peptona No. 3) 10,0000 g

·         Cloruro de sodio 5,0000 g

·         Lactosa 10,0000 g

·         Sacarosa 10,0000 g

·         Rojo de fenol 0,0800 g

·         Agar 20,0000 g

·         Verde brillante 0,0125 g

·         Agua destilada 1,0000 l

·         pH final: 6,9 ±; 0,2

      Preparación

·         Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada y calentar a ebullición, hasta disolución completa. Ajustar el pH.

·         Esterilizar en autoclave por 15 min a 121°C ±; 1°C. El sobrecalentamiento del medio disminuye su selectividad.

·         Enfriar el medio a 50°C y distribuirlo en cajas de petri estériles. El aspecto del medio es obscuro, de color marrón.

     

 3.2 Agar con sulfito de bismuto

      Fórmula

        Ingredientes /Cantidades Unidades

·         Extracto de carne de res 5,000 g

·         Mezcla de peptonas 10,000 g

·         Glucosa 5,000 g

·         Fosfato disódico (anhidro) 5,000 g

·         Sulfato ferroso (anhidro) 0,300 g

·         Sulfito de bismuto 8,000 g

·         Verde brillante 0,025 g

·         Agar 20,000 g

·         Agua destilada 1,000 l

·         pH final: 7,6 ± 0,2

        Preparación

   Suspender los ingredientes en un litro de agua. Calentar hasta su disolución completa, agitando frecuentemente. Ajustar el pH.

     Enfriar a 45°C y verter en cajas de petri estériles, distribuyendo de manera homogénea el precipitado propio del medio.

       El aspecto de las placas es opaco, de color verde pálido y deben usarse el mismo día de su preparación. Si la coloración es parda, no deben utilizarse.

        El medio no debe esterilizarse en autoclave; el sobrecalentamiento afecta su selectividad.

     

     3.3 Agar xilosa lisina Desoxicolato (XLD)

        Fórmula

           Ingredientes /Cantidades Unidades

·         Xilosa 3,75 g

·         L-lisina 5,00 g

·         Lactosa 7,50 g

·         Sacarosa 7,50 g

·         Cloruro de sodio 5,00 g

·         Extracto de levadura 3,00 g

·         Rojo de fenol 0,08 g

·         Agar 15,00 g

·         Desoxicolato de sodio 2,50 g

·         Citrato férrico-amónico 0,80 g

·         Tiosulfato de sodio 6,80 g

·         Agua destilada 1,00 l

·         pH final: 6,9 ± 0,2

        Preparación

     Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada, y calentar en baño de agua a 55°C, agitando   frecuentemente, hasta disolución completa. Ajustar el pH.

        Enfriar a 50°C y verter en cajas de petri estériles. No se esterilice.

      El sobrecalentamiento produce una precipitación; la reactividad del medio puede ser satisfactoria, pero las colonias suelen ser muy pequeñas.

El aspecto del medio es claro y de color rojo brillante.

3.4 Agar para Salmonella y Shigella (SS)

Fórmula

Ingredientes /Cantidades Unidades

·         Extracto de carne 5,000 g

·         Polipeptona * 5,000 g

·         Lactosa 10,000 g

·         Sales biliares 8,500 g

·         Citrato de sodio dihidratado 8,500 g

·         Tiosulfato de sodio pentahidratado 8,500 g

·         Citrato férrico 1,000 g

·         Agar 13,500 g

·         Rojo neutro 0,025 g

·         Verde brillante 0,330 mg

·         Agua destilada 1,000 l

·         pH final: 7,0 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en un litro de agua destilada estéril y calentar a ebullición hasta disolución completa. Ajustar el pH. No esterilizar en autoclave.

Enfriar a 50°C y distribuir en cajas de petri estériles en condiciones asépticas.

El aspecto del medio fundido es claro y de color rosado.

3.5 Agar entérico Hektoen

Fórmula

Ingredientes /Cantidades Unidades

·         Proteosa peptona 12,000 g

·         Extracto de levadura 3,000 g

·         Lactosa 12,000 g

·         Sacarosa 12,000 g

·         Salicina 2,000 g

·         Sales biliares 9,000 g

·         Cloruro de sodio 5,000 g

·         Tiosulfato de sodio 5,000 g

·         Citrato amónico férrico 1,500 g

·         Azul de bromotimol 0,064 g

·         Fuscina ácida 0,100 g

·         Agar 13,500 g

·         Agua 1,000 l

·         pH final: 7,5 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en agua destilada, hervir con agitación hasta completa disolución del agar. No sobre calentar.

Dejar enfriar a 55-60°C y distribuir en cajas de petri estériles en condiciones asépticas.

4.0 Medios para pruebas bioquímicas

4.1 Agar de tres azúcares y hierro (TSI)

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Peptona de carne * 1,0 g

Peptona de caseína * 1,0 g

Cloruro de sodio 0,5 g

Lactosa 1,0 g

Sacarosa 1,0 g

Glucosa 0,1 g

Agar 1,3 g

Rojo de fenol 2,5 mg

Sulfato ferroso amónico

pentahidratado 20,0 mg

Tiosulfato de sodio 20,0 mg

Agua destilada 100,0 ml

pH final: 7,3 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en 100 ml de agua destilada. Calentar a ebullición, agitando ocasionalmente, hasta disolución completa.

Enfriar a 60°c y ajustar el pH.

Distribuir en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar a 121°C durante 15 min. Inclinar los tubos de manera que el medio de cultivo en el fondo alcance una altura de 3 cm y una profundidad de 4 cm. El medio es de color rojo.

4.2 Agar de hierro y lisina (LIA)

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Peptona de gelatina 0,5 g

Extracto de levadura 0,3 g

Glucosa 0,1 g

L-lisina 1,0 g

Citrato férrico-amónico 50,0 mg

Tiosulfato de sodio anhidro 4,0 mg

Púrpura de bromocresol 2,0 mg

Agar 1,5 g

Agua destilada 100,0 ml

pH final: 6,7 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada y mezclar bien, calentar hasta ebullición con agitación frecuente hasta conseguir la disolución completa. Ajustar el pH.

Distribuir en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm, con tapón de rosca.

Esterilizar en autoclave a 121°C durante 12 min. Dejar que los tubos se enfríen en posición inclinada, de tal modo que se obtengan columnas de medio de 4 cm y una superficie inclinada de 2 cm.

El medio ya preparado es de color púrpura.

4.3 Agar nutritivo

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Extracto de carne 3,0 g

Peptona 5,0 g

Agar 15,0 g

Agua destilada 1,0 l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en agua. Dejar reposar de 5 a 10 min.

Calentar a ebullición hasta disolución completa. Distribuir en tubos de 13 x 100 mm, en cantidades de 1/3 de su volumen.

Esterilizar a 121°C por 15 min. Inclinar los tubos antes que el agar solidifique.

4.4 Medio de SIM (para Sulfuro, Indol y Movilidad)

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Extracto de carne 3,000 g

Peptona 30,000 g

Hierro peptonizado 0,200 g

Tiosulfato de sodio 0,025 g

Agua destilada 1,000 l

pH final: 7,3 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando frecuentemente hasta lograr una disolución completa.

Enfriar a 50°C y ajustar el pH.

Distribuir el medio en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min. Se dejan enfriar los tubos en posición vertical.

4.5 Agar citrato de Simmons

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Fosfato de amonio 1,00 g

Fosfato dipotásico 1,00 g

Cloruro de sodio 5,00 g

Citrato de sodio 2,00 g

Sulfato de magnesio 0,20 g

Azul de bromotimol 0,08 g

Agar 15,00 g

Agua destilada 1,00 l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando frecuentemente hasta lograr una disolución completa.

Ajustar el pH.

Distribuir el medio en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min.

Dejar enfriar los tubos en posición inclinada.

4.6 Caldo MR-VP (Rojo de metilo-Voges Proskauer)

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Peptona 7,0 g

Dextrosa 5,0 g

Difosfato de potasio 5,0 g

Agua destilada 1,0 l

pH final: 6,9 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en el agua destilada, calentar a ebullición agitando frecuentemente hasta lograr una disolución completa.

Ajustar el pH.

Distribuir el medio en volúmenes de 3 ml en tubos de 13 x 100 mm y esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min.

4.7 Caldo manitol

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Extracto de carne 1,000 g

Proteosa peptona 10,000 g

Cloruro de sodio 5,000 g

Rojo de fenol 0,018 g

Manitol 10,000 g

Agua 1,000 l

pH final: 7,4 ± 0,2

Preparación

Suspender 26 g del medio deshidratado en un litro de agua, mezclar y ajustar el pH.

Distribuir en volúmenes de 2 a 3 ml en tubos de 13 x 100 mm.

Esterilizar a 121°C durante 15 min.

4.8 Caldo malonato

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Extracto de levadura 1,000 g

Sulfato de amonio 2,000 g

Fosfato dipotásico 0,600 g

Fosfato monopotásico 0,400 g

Cloruro de sodio 2,000 g

Malonato 3,000 g

Glucosa 0,250 g

Azul de bromotimol 0,025 g

Agua 1,000 l

pH final: 6,7 ± 0,2

Preparación

Suspender los ingredientes en agua, mezclar y ajustar el pH.

Distribuir en tubos de 13 x 100 mm en cantidades de 3 ml.

Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 min.

4.9 Caldo urea

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Urea 20,00 g

Extracto de levadura 0,10 g

Fosfato monopotásico 9,10 g

Fosfato disódico 9,50 g

Rojo de fenol 0,01 g

Agua 1,00 l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en agua destilada.

NO CALENTAR. Esterilizar por filtración a través de membrana 0,45 micras o en autoclave de 5 a 8 lb de presión durante 15 min.

Distribuir asépticamente de 1,5 a 3 ml en tubos estériles de 13 x 100 mm.

4.10 Caldo de urea rápido

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Urea 20,000 g

Extracto de levadura 0,100 g

Fosfato monopotásico 0,091 g

Fosfato disódico 0,095 g

Rojo de fenol 0,010 g

Agua 1,000 l

pH final: 6,8 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en agua destilada.

NO CALENTAR. Esterilizar por filtración a través de membrana 0,45 micras

Distribuir asépticamente de 1,5 a 3 ml en tubos estériles de 13 x 100 mm.

4.11 Caldo infusión cerebro corazón

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Infusión cerebro corazón 200,0 g

Infusión de corazón de res 250,0 g

Proteosa peptona 10,0 g

Cloruro de sodio 5,0 g

Fosfato disódico dodecahidratado 2,5 g

Dextrosa 2,0 g

Agua destilada 1,0 l

pH final: 7,4 ± 0,2

Preparación

Disolver los ingredientes en agua destilada, calentar suavemente.

Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 min.

5.0 Soluciones

5.1 Solución verde brillante al 0,1% (1:1000)

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Verde brillante 0,1 g

Agua destilada estéril 100,0 ml

Disolver 0,1 g de verde brillante en agua destilada estéril hasta completar 100 ml.

5.2 Solución de yodo-yoduro

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Cristales de yodo 6,0 g

Yoduro de potasio 6,0 g

Agua destilada 100,0 ml

Disolver los cristales y el yoduro de potasio en agua destilada hasta completar 100 ml.

Conservar en frasco ámbar.

5.3 Solución salina al 0,85%

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Cloruro de sodio 0,85 g

Agua destilada 100,00 ml

Disolver el cloruro de sodio en el agua y esterilizar a 121°C durante 15 min.

5.4 Solución salina formalizada

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Solución de formaldehído (36-38%) 6,0 ml

Cloruro de sodio 8,5 g

Agua destilada 1,0 l

Disolver 8,5 g de cloruro de sodio en 1 litro de agua destilada. Esterilizar a 121°C durante 15 min.

Enfriar a temperatura ambiente. Adicionar 6 ml de la solución de formaldehído. No esterilizar después de la adición de formaldehído.

5.5 Reactivo de Kovac

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

p-dimetil-aminobenzaldehído 5,0 g

Alcohol amílico 75,0 ml

Acido clorhídrico concentrado 25,0 ml

Disolver el p-dimetil-aminobenzaldehído en el alcohol amílico y después agregar el ácido clorhídrico lentamente. Conservar en frasco ámbar en refrigeración.

5.6 Solución de alfa-naftol al 5%

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Alfa-naftol 5,0 g

Alcohol 100,0 ml

Disolver 5 g de alfa-naftol en alcohol hasta completar 100 ml.

5.7 Solución de rojo de metilo

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Rojo de metilo 0,10 g

Alcohol etílico 300,00 ml

Agua destilada c.b.p. 500,00 ml

Disolver el rojo de metilo en el alcohol etílico y adicionar agua hasta completar 500 ml.

5.8 Solución de hidróxido de potasio al 40%

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Hidróxido de potasio 40,0 g

Agua destilada 100,0 ml

Disolver 40 g de hidróxido de potasio en agua hasta completar 100 ml.

5.9 Solución de gelatinasa al 5%

Fórmula

Ingredientes Cantidades Unidades

Gelatinasa 5,0 g

Agua 100,0 ml

Disolver 5 g de gelatinasa en 100 ml de agua destilada. NO CALENTAR.