domingo, 1 de abril de 2012

Técnicas de esterilización



El calor es el método de elección para esterilizar el material de laboratorio resistente a las altas temperaturas. La temperatura y el tiempo requeridos para esterilizar un material dependen de que se esté utilizando calor seco o calor húmedo.
Todo el material que tenga contacto con las muestras bajo estudio debe esterilizarse mediante:
Horno, durante 2 horas a 170-175°C o autoclave, durante 15 min como mínimo a 121°;C

Material:
Matraces erlenmeyer (250, 500 y 1000 mL)
Pipetas (1 y 10 mL)
Probeta de 100 mL
Espátula y agitador de vidrio
Mechero, tripie y tela de asbesto
Tubos de esnaye ( de 16X150mm y 22X175mm)
Cajas de preti de vidrio o plastico
Vaso de precipitado de 250 mL
Gradilla y mosca
Algodón y papel de envoltura

Equipo:
Autoclave
Balanza semi-analítica
Parrilla de calentamiento y vibración 

REALIZAR EL LAVADO DEL MATERIAL A ESTERILIZAR
1. Lavar el material de vidrio (pipetas, tubos y matraces) utilizando el escobillón apropiado y detergente aniónico.
2. Lavar las cajas de petri, material plano e instrumental con una fibra suave (esponja) y detergente aniónico
3. Enjuagar con abundante agua los materiales lavados en los pasos 1 y 2
4. Enjuagar con agua destilada, escurrir y secar en el horno a  temperatura ambiente
PREPARACIÓN DEL MATERIAL PARA ESTERILIZAR POR CALOR HÚMEDO
Tubos de ensaye
1. Tapar dos tubos de ensaye de 16x150 mm con tapones de algodón siguiendo las instrucciones del profesor.
2. Colocar los tubos en un bote de lámina, taparlos con gorros de papel kraft y asegurarlos con una liga.
3. Colocar sobre los tubos un trozo de cinta indicadora.
4. Anotar en una etiqueta fecha, equipo, grupo, medida de los tubos y cantidad preparada y sujetarla a los tubos preparados.
Cajas de petri
1. Envolver 8 cajas de petri con papel kraft siguiendo las indicaciones del profesor.
2. Etiquetar sobre el papel escribiendo los siguientes datos: fecha, equipo, grupo y cantidad de cajas envueltas.
3. Colocar sobre el papel un trozo de cinta indicadora
Pipetas
1. Colocar en la boquilla de cada una de las pipetas un tapón de algodón utilizando una aguja de disección o un clip metálico, cuidando que no quede muy compactado.
2. Flamear (solo si es necesario) en la flama del mechero las boquillas de las pipetas a fin de eliminar el exceso de algodón.
3. Envolver de manera individual cada una de las pipetas con una tira de papel kraft iniciando en la punta y fijar el extremo del papel (boquilla) con cinta indicadora y anotar la capacidad.
4. Escribir sobre el papel la fecho, equipo y grupo.
Matraces
1. Colocar en la boca de cada matraz un tapón de algodón siguiendo las instrucciones del profesor.
2. Elaborar un gorro de papel kraft ligeramente más grande que el tapón de algodón.
3. Colocar sobre los matraces un trozo de cinta indicadora.
4. Etiquetar los matraces escribiendo fecha, equipo y grupo.
Material instrumental
1. Envolver con papel kraft la tijera y la pinza
2. Dibujar  con lápiz  una flecha que indique la punta.
3. Anotar sobre el papel la pieza de que se trate, fecha, equipo y grupo.
Portamembranas y membranas
1. Abrir el portamembranas y revisar que contenga el empaque.
2.- Colocar con ayuda de una pinza la membrana.
3. Cerrar el portamembranas.
4. Envolver en papel kraft.
PREPARACIÓN DEL MATERIAL PARA ESTERILIZAR POR CALOR SECO
Tubos de ensaye
1. Colocar en dos tubos de ensaye una cubierta de papel aluminio.
2. Colocarlos en una gradilla metálica.
3. Hacer una etiqueta con la fecha, equipo y grupo y sujetarla a la gradilla.
4. Colocar en los tubos un trozo de cinta indicadora
Cajas de petri
1. Colocar en un cilindro metálico para cajas petri dos cajas en posición invertida (NOTA: Este método no se debe utilizar para esterilizar material contaminado)
2. Colocar una etiqueta sobre el cilindro con la fecha, el no. De cajas que contiene el cilindro, equipo y grupo.
3. Colocar sobre el cilindro un trozo de cinta indicadora.
Pipetas
1. Colocar en la boquilla de cada una de las pipetas un tapón de algodón con ayuda de una aguja de disección o un clip metálico.
2. Flamear las boquillas (solo si es necesario) en la flama del mechero a fin de eliminar el exceso de algodón.
3. Colocar en el interior del  cilindro pipetero  un poco de papel aluminio para evitar que la punta de las pipetas se rompa.
4. Colocar las pipetas en el interior del cilindro pipetero.
5. Colocar sobre el cilindro pipetero una etiqueta con la capacidad de las pipetas, fecha, equipo y grupo.
6. Colocar sobre el cilindro pipetero un trozo de cinta indicadora.
Matraces
1. Colocar en la boca de un matraz de 125mL una tapa de papel aluminio.
2. Etiquetarlos con la fecha, equipo y grupo.
Pinzas y tijeras
1. Envolver con papel aluminio por separado una pinza y una tijera.
2. Etiquetarlas con fecha, equipo y grupo.
Esterilización por calor húmedo
Algunas consideraciones que se deben tener en cuenta cuando se esteriliza con calor húmedo son las siguientes:
·         Tener cuidado de eliminar todo el aire del autoclave
·         Colocar agua suficiente hasta el nivel de la rejilla o en la marca del autoclave vertical
·         Cuando se caliente el autoclave observar que no salga vapor por la tapa, en caso de suceder revisar el empaque
·         Si se está utilizando autoclave vertical
1. Preparar un tubo de ensaye de 13x100mm con 3mL de caldo nutritivo estéril y etiquetarlo
2. Colocar en el tubo una tira de esporas de Geobacillus stearothermophilus, tapar el tubo con tapón de algodón y esterizarlo en autoclave a 121°C y 15 lb/pul de presión durante  minutos. En este punto colocar el material preparado para esterilizar por calor húmedo.
3. Los tubos de la sección 4.1 puntos 2 y 4 son los testigos positivo y negativo respectivamente.
4. Incubar el tubo a 55°C durante cinco días a baño maría y observar diariamente.
5. Anotar en la  bitácora de laboratorio cualquier cambio en cuanto a la aparición de turbidez.
 Esterilización por calor seco
1. Precalentar el horno a 170°C.
2. En un tubo de ensaye de 16x150 mm sin esterilizar y vació colocar una tira de papel filtro que contenga esporas de Bacillus subtilis y cubrir la boca del tubo con papel aluminio.
3. Colocar el material preparado para esterilizar y el tubo del punto 2 en el horno precalentado a 170°C  esperar que la temperatura se ajuste nuevamente a 170°C, en ese momento empezar a medir el tiempo de 1h.
4. Los tubos de la sección 4.1 puntos 2 y 4 son los testigos positivo y negativo respectivamente.
5. Después de transcurrido el tiempo de esterilización, apagar el horno y esperar a que el termómetro indique la temperatura ambiente. Abrir el horno retirar el material y el tubo de ensaye  con la tira de esporas.
6. Con ayuda de una pinza estéril y bajo condiciones asépticas colocar la tira de papel filtro conteniendo las esporas de Bacillus subtilis a un tubo de ensaye de 16x150 mm que contenga 3 mL de caldo nutritivo estéril y etiquetarlo.
7. Incubar a 55°C durante 24-48 h. Observar diario y anotar en la bitácora de laboratorio cualquier cambio en cuanto a la aparición de turbidez



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